细胞划痕实验原理及步骤

一、细胞划痕实验原理

　　细胞划痕实验(Wound Healing)是一种操作简单，经济实惠的研究细胞迁移/肿瘤侵袭的体外试验方法。这种方法的原理是，当细胞长到融合成单层状态时，在融合的单层细胞上人为制造一个空白区域，称为“划痕”，划痕边缘的细胞会逐渐进入空白区域使“划痕”愈合，在一定程度上模拟了体内细胞迁移的过程，是研究细胞迁移的体外实验中最简单的方法。

　　二、细胞划痕实验步骤

　　1、细胞划痕实验所需材料：

　　6孔板

　　marker笔

　　直尺

　　20微升枪头(灭菌)

　　无血清培养基

　　PBS

　　2、细胞划痕实验具体步骤如下：

　　(1)准备工作：所有能灭菌的器械都要灭菌，直尺和marker笔在操作前紫外照射30min(超净台内)

　　(2)先用marker笔在6孔板背后，用直尺比着，均匀地划横线，大约每隔0.5~1cm一道，横穿过孔。每孔至少穿过5条线。

　　(3)在空中加入约5X105个细胞，具体数量因细胞不同而不同，掌握为过夜能铺满。

　　(4)第二天用枪头比着直尺，尽量垂直于背后的横线划痕，枪头要垂直，不要倾斜。

　　(5)用PBS洗细胞3次，去除划下的细胞，加入无血清培养基。

　　(6)放入37℃5%CO2培养箱培养。按0、6、12、24小时取样，拍照。

　　三、细胞划痕实验注意事项

　　1.划痕法测量适用的细胞范围较小，一般只适用于上皮细胞，纤维样细胞。

　　2.虽然无血清培养可以忽略细胞增殖的影响，但是由于细胞内信号传导系统整体性的下调节，细胞迁移的速度也会慢很多。