实验室分子生物学常用试剂的配制有哪些

　　1、琼脂糖凝胶的配制

　　根据所需凝胶的浓度秤取琼脂糖，加入相应电泳缓冲液中，用微波炉加热煮沸至琼脂糖完全溶解，加入适量E混匀，适当冷却后倾入凝胶铸槽中，插入梳子，凝胶厚度不超过梳孔，如有气泡产生则用玻璃棒驱除，不能过早拔除梳子，应待凝胶完全凝结后才能拔除梳子。

　　2、P1、P2、P3的配制

　　1的配制：在800ml去离子水中溶入Tri碱6.06g，Na2EDTA 2H2O3.72g，用HCl调整H至8.0，用去离子水调整容积至1升，每升P1内加入RNaseA100mg。

　　P2的配制：在950ml去离子水中溶入aOH8.0g，20%SD50ml，调整容积至1升。

　　P3的配制：在500ml去离子水中溶入醋酸钾294.5g，用冰醋酸调整H值至5.5，用去离子水调整容积至1升。

　　3、LB(Luria-Bertani)培养液、平板的配制

　　配制每升LB培养液，应在950ml去离子水中加入：细菌培养用酵母提取物(bacto-yeastextract)5g，细菌培养用胰化蛋白胨(bacto-tryptone)10g，NaCl10g。

　　摇动容器直至溶质完全溶解，用5mol/LNaOH(约0.2ml)调节pH值至7.0，加入去离子水至总体积为1L，在151bf/in2(1.034×105Pa)高压下蒸汽灭菌20min。

　　4、甲酰胺( deionized formamide )的配制

　　直接购买或加 Dowex XG8 混合树脂于装有甲酰胺的玻璃烧杯中， 用磁力搅拌器轻轻搅拌 1h，可去除甲酰胺中的离子。 经 Whatman 1 号滤纸过滤除去树脂后分成小份，充氮气于 -80 ℃ 贮存(防止氧化)。

　　5、苯酚/ 氯仿/异戊醇的配制

　　将 Tris-HCl 平衡苯酚与等体积的氯仿 / 异戊醇( 24：1 )均匀混合后，移入棕色玻璃瓶中 4 ℃保存。

　　6、PBS Buffer配置方法 (1L):

　　组份:137 mM NaCl ， 2.7mM KCl ， 10 mM Na2HPO4 ， 2 mM KH2PO4

　　(1)称量下列试剂，置于 1L 烧杯中。

　　NaCl 8 g

　　KCl 0.2g

　　Na2HPO4 1.42 g

　　KH2PO4 0.27g

　　(2)向烧杯中加入约 800 mL 的去离子水，充分搅拌溶解。

　　(3)滴加 HCl 将 pH 值调节至 7.4 ，然后加入去离子水将溶液定容至 1L。

　　(4)高温高压灭菌后，室温保存。

　　注意：上述 PBS Buffer 中无二价阳离子， 如需要，可在配方中补充 1mM　CaCl2 和 0.5 mM MgCl2 。

　　7、考马斯亮蓝染色脱色液的配置方法

　　组份浓度 10 %( V/V )醋酸， 5%( V/V )乙醇，配制量 1L

　　(1) 量取下列溶液，置于 1L 烧杯中。醋酸 100mL，乙醇 50mL dH2O 850mL

　　(2)充分混合后使用。

　　8、30%( W/V ) Acrylamide的配置方法 ：

　　(1) 称量下列试剂，置于 1L 烧杯中

　　Acrylamide 290g

　　BIS 10g

　　(2)向烧杯中加入约 600mL 的去离子水，充分搅拌溶解

　　(3)加入去离子水将溶液定容至 1L，用 0.45 μm 滤膜滤去杂质。

　　(4) 于棕色瓶中 4℃ 保存。

　　注意：丙稀铣胺具有很强的神经毒性，并可通过皮肤吸收，其作用有积累性，配制时应戴手套等。聚丙烯酰胺无毒，但也应谨慎操作，因为有可能含有少量的未聚合成份。